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13817140470更新時(shí)間:2014-03-28 瀏覽次數(shù):1905
轉(zhuǎn)染方法、原理及應(yīng)用
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DEAE-右旋糖苷法
帶正電的DEAE-右旋糖苷與核酸帶負(fù)電的磷酸骨架相互作用形成的復(fù)合物被細(xì)胞內(nèi)吞 瞬時(shí)性轉(zhuǎn)染 相對(duì)簡(jiǎn)便、結(jié)果可重復(fù)但對(duì)細(xì)胞有一定的毒副作用,轉(zhuǎn)染時(shí)需除血清。
磷酸鈣法
磷酸鈣DNA復(fù)合物吸附細(xì)胞膜被細(xì)胞內(nèi)吞 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,瞬時(shí)性轉(zhuǎn)染 不適用于原代細(xì)胞,操作簡(jiǎn)便但重復(fù)性差,有些細(xì)胞不適用。
電穿孔法
高脈沖電壓破壞細(xì)胞膜電位,DNA通過(guò)膜上形成的小孔導(dǎo)入 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,瞬時(shí)性轉(zhuǎn)染,所有細(xì)胞 適用性廣但細(xì)胞致死率高,DNA和細(xì)胞用量大,需根據(jù)不同細(xì)胞類型優(yōu)化電穿孔實(shí)驗(yàn)條件。
陽(yáng)離子性的脂質(zhì)體法
帶正電的脂質(zhì)體與核酸帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)形成復(fù)合物被細(xì)胞內(nèi)吞穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。
瞬時(shí)性轉(zhuǎn)染,所有細(xì)胞 適用性廣,轉(zhuǎn)染效率高,重復(fù)性好但轉(zhuǎn)染時(shí)需除血清。
轉(zhuǎn)染效果隨細(xì)胞類型變化大
病毒介導(dǎo)法 逆轉(zhuǎn)錄病毒 通過(guò)侵染宿主細(xì)胞將外源基因整合到染色體中穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,特定宿主細(xì)胞 可用于難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞、原代細(xì)胞,體內(nèi)細(xì)胞等,但攜帶基因不能太大 細(xì)胞需處分裂期,需考慮安全因素 ,腺病毒 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染,特定宿主細(xì)胞 可用于難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞,需考慮安全因素。
Biolistic 顆粒傳遞法
將DNA用顯微重金屬顆粒沉淀,再將包被好的顆粒用彈道裝置投射入細(xì)胞,DNA在胞內(nèi)逐步釋放,表達(dá)瞬時(shí)性轉(zhuǎn)染 可用于:人的表皮細(xì)胞,纖維原細(xì)胞,淋巴細(xì)胞系以及原代細(xì)胞。
顯微注射法
用顯微操作將DNA直接注入靶細(xì)胞核 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,瞬時(shí)性轉(zhuǎn)染 轉(zhuǎn)染細(xì)胞數(shù)有限,多用于工程改造或轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的胚胎細(xì)胞。
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