常見實驗中，細胞爬片實驗是科研人員比較頭疼的問題，因為它會存在很多你意想不到的卻又十分重要的問題。以下就是實驗室常見的也是學生經常提到的細胞爬片的問題解答，給大家做這方面實驗的一個參考意見，避免大家在實驗過程中缺乏經驗而走彎路。

elisa試劑盒解析1.  細胞爬片可以用含疊氮鈉PBS液保存，但不知道具體濃度，請告知。

答：加在液體中作為防腐劑的疊氮鈉濃度一般為0.04–0.08%。但是我建議對于細胞爬片，還是盡量快的進行處理，以防不必要的問題！

elisa試劑盒解析2.  我的細胞爬片經過4%多聚甲醛固定，PBS沖洗后直接就放在了-20度，還能用于免疫組化嗎？！

答：應該沒有問題，但是還是現作先染好些，以防抗原的丟失

3.  mRNA原位雜交經4%多聚甲醛固定,固定液需加DEPC水。其它建議用甲醇固定。－20度保存。

4.  如果是4%多聚甲醛固定，然后放在PBS中保存，在4度冰箱里保存兩周沒問題。時間再長就沒試過了。

5.  丙酮中固定5-10分鐘，然后風干，放置4度保存過夜應該是沒有問題。不要固定過夜，蛋白質固定過度，會影響抗原的暴露，影響免疫組化結果。如果是胞漿 或胞核抗原出現假陰性結果，可考慮應用0.5%的triton-100孵育30分鐘，滲透細胞膜。如果玻片沒有經過特殊處理，不要用其他抗原修復的方法， 會造成掉片，我曾有過這方面的體會。

6.  丙酮固定后，PBS洗滌3次，即可保存至4度冰箱備用。

elisa試劑盒解析7. （1）細胞爬片先用TBS洗3次，每次5分鐘

（2）4%多聚甲醛固定，室溫，20分鐘

（3）70%-80%-90%-95%-100%梯度酒精脫水，通風櫥內干燥，-80度保存。2周沒有問題的，我保存過2個月都有信號，不過還是保存時間短一點的好。

8.  我的心肌細胞爬片用不同濃度的乙醇依次脫水后,就放在室溫中,因為是要拍電鏡,但是學校電鏡壞了,呵呵,所以放了一個月后去拍,還是很好。

9.  細胞爬片用4%多聚甲醛或冷丙酮等固定，用PBS沖洗后，晾干，放在-20度保存一個月沒有問題的。

10.  細胞爬片，有機溶劑如4%多聚甲醛或冷丙酮等固定后，輕輕搖動玻片或培養(yǎng)皿等，靜置2 min左右，棄去固定液，不用PBS洗而是采用空氣干燥，干燥后的標本可于-70℃長期保存。解凍時要小心抗原破壞，應先將標本轉移于干冰預冷的固定液， 然后再將混合液轉移至室溫下，固定液到達室溫時取出標本，再用PBS沖洗，在做以后的步驟。

11.  我也做過細胞爬片的組化染色，不過沒有遇到類似的問題。細胞培養(yǎng)好后用PBS洗一遍，然后4%多聚甲醛4度固定15分鐘，自然風干。室溫保存幾周內都可 以用的。我想這可能與抗原的類型有關，有的對氧化等損傷比較敏感，有的差一些。避光保存在4度，同時盡量隔絕空氣。免疫熒光與普通DAB顯色差別只再 二抗的標記，樣品的保存應該是沒有多大差別的。

12.  細胞爬片丙酮固定后-20度保存，現在要再做免疫熒光，將保存的爬片拿出37度復溫然后常規(guī)操作就可以了。

13.  爬片做免疫組化的優(yōu)勢在于抗原新鮮，細胞形態(tài)保存較好。若爬片需長期保存并出現你這樣的問題，原因可能是：1）試驗步驟有誤，建議重復并加陽性對照片。 2）加一抗前處理同石蠟切片，可進行抗原修復，如胰酶消化或熱修復。3）因為抗原抗體反應在液相中進行，故對已極度干燥的爬片充分水化很重要。建議試驗前 用PBS浸泡過夜。如不能解決你的問題請：。本人在湖南省腫瘤醫(yī)院病理科（長沙市）做免疫組化。

14.  4%多聚甲醛或冷丙酮固定都可以，也有用*的，固定好后放-20度，2-3個月是沒有問題的。

elisa試劑盒解析15. 對于一般的細胞免疫組化，我的做法是：細胞爬片用冰的純丙酮固定20 min，再在通風柜將丙酮吹干，—-20度保存，用丙酮固定作用是沉淀蛋白質和糖，穿透性很強，保存抗原的免疫活性好。所以丙酮常用做細胞細胞爬片的固定 劑。當然還是要根據你的實驗目的決定用那種固定劑。

如：1．多聚甲醛(常用4%)：可用于免疫電鏡；也可用于免疫熒光染色。 主要檢測組織內一些性能嬌弱的抗原特別是細胞表面抗原，例如各類淋巴細胸分化決定簇(CD)、主要組織相容性抗原等。

2．乙醇。優(yōu)點：穿透性強、抗原性保存較好。缺點：但醇類對低分子蛋白質、多肽及胞漿內蛋白質保存效果較差，使蛋白變性的作用輕，固定后可再溶解；染色過程中，溫育時間長，抗原可流失而減弱反應強度。

3．甲醛(福爾馬林)應用zui廣 優(yōu)點：形態(tài)結構保存好，且穿透性強， 缺點： 甲醛放置過久可氧化為甲酸，使溶液pH降低，影響染色； 分子間交聯形成的網格結構可能部分或*掩蓋某些抗原決定簇，使之不能充分暴露?？稍斐杉訇幮缘娜旧Y果。

16. 4度是不能保存這么長時間（1個月）的，如果抗原已被分解，再修復也沒用！

17.  棄去固定液，不用PBS洗而是采用空氣干燥，干燥后的標本可于-70℃長期保存。

18.  爬片置于37度PBS中洗三次，每次3到5秒鐘，然后在4%多聚甲醛中固定15分鐘，然后再用37度去離子水將甲醛沖干凈，注意手法輕柔，要不然掉片很厲害。同時操作過程中注意玻片的正反面，要不然真的是前功盡棄。

將做好的爬片置于濾紙上晾干，然后用中性樹膠粘在載玻片上。注意一定要等中性樹膠*干了之后才能做后續(xù)實驗，要不然玻片會掉下來的，就又是前功盡棄了 做好的細胞爬片可以放在-20保存?zhèn)溆?，具體能保存多長時間不太清楚，當然盡量早用。

19.  固定后放點PBS，然后放在4度冰箱中保存，我zui長保存兩個月的，然后再做免疫組化，應該沒有太大的問題的。

20.  固定后4度可以存放一周，-20度存放半年，我現在也要做這個，實驗室老師教的。

21.  四度放1周應該沒問題的，你放在-20度，我在-20度放一個月都還出結果的．很多人作的片子很多，不可能一次作完，一個月沒問題。

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